輸血時如果血型不合會造成患者出現(xiàn)輸血的不良反應(yīng),因此使用相符的血型是輸血安全的前提保證。而作為人類的重要遺傳標(biāo)志,血型,在近年科學(xué)的發(fā)展下,人們逐步探索分析,已發(fā)現(xiàn)300余種現(xiàn)人類紅細(xì)胞血型抗原。當(dāng)今,世界多國正努力建立稀有血型細(xì)胞血庫,當(dāng)中對所發(fā)現(xiàn)的稀有血型,如Rh、MNSs、P、Kell、Kidd、Lutheran等,建立起稀有血型系統(tǒng),以保證為稀有血型的患者更加快速及時地提供合適紅細(xì)胞。
中國稀有血型篩選與建庫:
在我們的臨床研究中,對于稀有血型的篩選工作和具體項目中,對于引發(fā)臨床不良輸血反應(yīng)的稀有血型抗原或是表型組合是可以關(guān)注的,而事實證明這些稀有抗原或是表型組合往往存在于如Vel、Lan、Jk(a-b-)、Lu(a-b-)、Rhnull、OH等這些高頻率血型抗原組以及多個血型系統(tǒng)中,與此同時我們也對如Fy(a-b+)、Di(a+b-)等能引起輸血反應(yīng)和新生兒溶血病的血型抗原的中國人*的免疫反應(yīng)而進(jìn)行的篩選,并希望建立起符合我國國情的稀有血型庫。以此來解決我國臨床上的稀有血型不足、不良輸血反應(yīng)的發(fā)生等問題來提高我國的輸血療效。
尿素溶血試驗:Jk(a-b-)表型的篩選:因稀有血型本身所具有特殊性,充分利用其特點設(shè)計出將其篩選出的方法,Kidd血型系統(tǒng)中Jk(a-b-),此種紅細(xì)胞可在2M的尿素溶液中使其紅細(xì)胞膜在6h以上的時間內(nèi)保持完整性。而Jka和Jkb抗原的紅細(xì)胞在2M尿素溶液中*溶血的時間不超過30s。其操作過程為:選取RSP加樣器設(shè)備將標(biāo)本紅細(xì)胞稀釋到1%的懸液中,并在96孔微量板上加20ul懸液,再將100ul2mol/L尿素溶液加入其中,放置離心機中以800r/min轉(zhuǎn)速離心3min,溶血為陽性,不溶血為陰性,如為陰性者則進(jìn)一步對血細(xì)胞做分子生物學(xué)分析。本次通過Jk(a-b-)尿素篩選實驗,獲得8名Jk(a-b-)表型獻(xiàn)血者。
試管法:將選取標(biāo)本紅細(xì)胞稀釋為2-5%懸液,標(biāo)記試管(抗-Mur、-Lub、-Rhmull、-Kell、-MN、-H)并加入相應(yīng)抗血清和標(biāo)本紅細(xì)胞各50ul。采用直接離心法或間接抗球蛋白法,輕搖觀察結(jié)果;發(fā)生凝集為陽性,反之為陰性,共發(fā)現(xiàn)稀·臨床研究·有血型7例。
在我們對稀有血型篩選過程中,有4種稀有血型是采用篩選稀有等位基因的方法。通過采用PCR的定點誘變技術(shù),我們成功構(gòu)建出含有突變SNP位點的s和Oka血型等位基因的標(biāo)準(zhǔn)質(zhì)粒,制備出稀有血型等位基因突變點片段,應(yīng)用在對照分子生物學(xué)方法篩選稀有血型。組建多個多重PCR體系,檢測等位基因。
應(yīng)用問題:針對稀有血型的應(yīng)用世界各地各有區(qū)別,繁簡寬松不一。對于未經(jīng)檢測血液,有的國家如法國,緊急情況下,在得到國家輸血機構(gòu)主任同意后,可以使用被感染(艾滋病感染的除外)的獻(xiàn)血者血液。而有的國家直接把決定權(quán)交給醫(yī)生。另一方面,稀有血型的稀少導(dǎo)致在血液的儲存、獲取都存在了問題,這些問題正待解決。
在當(dāng)前來看,歐美、日本都發(fā)達(dá)國家都先后完成了各自的稀有血型庫的篩選工作,這也預(yù)示著稀有血型的篩選工作也得到了世界各國原來越多的關(guān)注與重視,而DT5-2低速臺式自動平衡離心機在血細(xì)胞分離中起到關(guān)鍵作用。而隨著當(dāng)前IDP和ISBTW/P的逐步完善,使得稀有血型庫的發(fā)展勢頭愈發(fā)強勁,稀有血型項目帶來了安全輸血的態(tài)勢。對于中國來講,人種和血型的多樣化給我國的稀有血型的篩選工作帶來了便利,就當(dāng)前而言,雖然我國大部分稀有血型尚不明確,但本次篩選也*空缺。并為X市血液中心籌建的“中國稀有血型庫”提供相關(guān)基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。在解決臨床稀有血型的輸血問題時,稀有血型的篩選并建立相應(yīng)的網(wǎng)絡(luò)體系是極其重要的,而擴大篩選范圍、增加驗證體系都有助于我國稀有血型庫的壯大。同時醫(yī)用離心機技術(shù)參數(shù)和穩(wěn)定性的提升都使實驗過程得到了保障。